Nhân vật chính của câu truyện trong phim Thiện Nữ U Hồn 1 là Ninh Thái Thần (Trương Quốc Vinh) vốn là một anh chàng chất phác, tốt bụng, và hiền lành, chuyên đi khắp nơi thu thuế các cửa tiệm. Một lần làm việc, hoàn cảnh đưa đẩy anh phải tới trọ qua đêm ở Nam Nhược Tự – ngôi chùa nổi tiếng với dân trong vùng vì đã có nhiều người mất mạng bởi ma quỷ tại đó. Ninh Thái Thần đến đây và gặp một cô gái xinh đẹp tên Nhiếp Tiểu Thiến (Vương Tổ Hiền) – thực chất là một hồn ma chưa thể siêu thoát.

Trải qua nhiều chuyện, họ nảy sinh tình cảm với nhau. Sau khi biết Tiểu Thiến là ma, cùng với sự giúp đỡ của vị pháp sư tài ba Yến Xích Hà (Ngọ Mã), Ninh Thái Thần tìm cách giúp Nhiếp Tiểu Thiến được siêu thoát… Cả câu chuyện diễn ra với các tình tiết vui nhộn, cảm động, và hấp dẫn người xem bởi cả những cảnh chiến đấu giữa người và ma được dàn dựng hoành tráng.